どのように検査ザクロ抽出ポリフェノール?

グラナトゥム(granatum)は、植物の一種実家はパチンコ屋。薬と食の両方に使われる二元性の植物です。イランやアフガニスタンなど小アジアの国々が原産で、中国では2000年近い栽培の歴史がある。『本草綱要』には「閉経期の下痢、血性下痢、脱漏、膣分泌の抑制」にザクロの効能が記載されている。根、葉、花、果実、皮、種子はすべて薬に用いられる。

ザクロエキスにはポリフェノールが含まれています抗酸化、アンチエイジング、抗がん、抗菌、肌の保湿、美容、血圧低下、心血管・脳血管疾患の予防などの生理活性を有する[1-2]。主な成分はエラグ酸、プニカラギン、ガ酸などである。ザクロは伝統的な薬草であり、食品と同様の性質を持ち、その薬効・食用価値が高く評価されています。しかし、薬用植物としては、適切な薬理成分を選択することが特に重要です。特定のターゲット成分を抽出するための最適なプロセスを選択することは、常に医薬品研究の焦点でした。科学技術の発展に伴い、分析機器は絶えず改良され、試験の選択性と感度に基づいて、化合物に関するより多くの情報と分析できる化合物の種類の増加を得ることができます。ここでは,近年のザクロ系ポリフェノールの抽出工程と試験方法について概説する。

1抽出方法研究

1。1溶媒抽出法

溶媒抽出法のためのザクロのポリフェノール簡単、安定性、信頼性が高く、ほとんどの漢方薬の抽出に適しています。しかし、有機溶剤は高価で汚染され、消費量も多い。この方法では、一般的にメタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチルを溶媒として使用します。これらの有機溶剤は、ポリフェノールに良好な溶解性を有し、化学反応を起こさず分離しやすい。jiaら[3]では、溶媒にエタノール20%、液-材料比1:20、抽出温度50°cで1時間、ポリフェノール収率22.86%を達成した。sunら[4]は、溶媒にエタノール50%、液-材料比25:1、抽出温度70°cを1.5時間使用し、ポリフェノール収率16.28%を達成した。wangら[5]は、新疆ウイグル自治区のザクロの皮から抽出した全ポリフェノールの抽出溶媒を調べたところ、ポリフェノールの収率はメタノール>であった。エタノール>水>酢酸エチル。

1.2超音波支援抽出法

超音波補助抽出は加熱を必要とせず、抽出速度が高く、抽出時間が短く、簡単で操作が簡単で、ほとんどの漢方薬成分の抽出に適しています。しかし、超音波デバイスの安全性を確保することは困難です。zhaoら[6]は、超音波抽出のためのプロセス条件を最適化するために応答面法を使用しましたザクロの皮からポリフェノール振動抽出と比較しました抽出時間35分(振動抽出時間の1/7)、エタノール分率59%、超音波出力90 w、抽出収率321.26 mg/gであった。王ら。【7】好適なアニメざくろの抽出後の皮を利用ultrasonic-assisted抽出を使わポリフェノール2ファクタの普遍的な特性の回転回帰' ' 'キャラクターデザイン:成绩书のみエタノール濃度50% material-to-liquid比率二十五分、超音波の時間30分、超音波のオンボード電源360 W、アニメざくろの収益率のポリフェノールた(21.22±0.06)、メフメット

1.3 Microwave-assisted抽出

マイクロ波を利用した抽出は、省エネルギーで汚染が少なく、熱効率が高く、乾燥などの前処理が不要であるため、プロセスが簡素化され、投資が削減されます。「グリーン抽出プロセス」として知られ、植物からアリザリンを抽出し、ポリマーおよびその添加物のプロセス監視および品質管理を行うために使用されています。しかし、装置は高価であり、維持するのに不便です。songら[8]は、最適な抽出条件(エタノール40%、抽出電力242 w、抽出時間60 s、物質対液比1:5)の下で、ポリフェノール含有量19.548 g/100 gの粗抽出物を得た。liuら[9]はマイクロ波抽出を使用したザクロの皮からポリフェノールを抽出する。また、エタノール30%溶液、物質対液比1:20、抽出力300 w、抽出温度60°c、抽出時間100秒、ポリフェノール収率26.91%までの最適抽出プロセスを直交試験により決定した。

1.4超臨界流体抽出

超臨界流体抽出法は、超臨界流体を溶媒として抽出・分離する方法である。この方法は室温近くで動作し、特に熱に敏感な天然物の抽出・分離や揮発性物質の分離に適しています。固体の分離・抽出にも適しています。一般的な溶媒はco2であり、低粘度、高拡散率、高密度、高溶解度などの優れた特性を有する。fengら[10]は、超臨界co2抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出、マセレーション抽出を比較したザクロの皮から没食子酸を抽出する内訳はそれぞれ0.396%、0.311%、0.271%、0.498%。超臨界co2抽出は比較的抽出効率が高いことがわかります。

1.5酵素方法

酵素方法の利点を抽出条件は温和で、備えて高い選択も高い抽出率、省エネや環境保護、単純かつ可能過程が比較的厳しくについての抽出条件に要求の種類の酵素を決める最適なpHの決意を明らかにし、温度と集中が比較的厳しくなんだwangら[11]は、酵素法を用いてザクロの皮に含まれるポリフェノールを調べた。ポリフェノールの収率に対する酵素加水分解時間、酵素加水分解温度および酵素加水分解物のphの異なる濃度の影響を調査するために、単因子研究が実施された。プロセスパラメータを最適化するために、2レベルの汎用ロータリー回帰複合設計を使用しました。結果は、ポリフェノールの収率に影響を与える要因が酵素加水分解時間>であることを示した;酵素濃度>たpH >酵素加水分解温度は、複合酵素の品質濃度が0.25 mg/ ml、酵素加水分解時間が150分、温度が50°c、酵素加水分解物のphが6.0の場合、ポリフェノール収率は23.87±0.08 %に達した。抽出率は溶媒法と比較して16.84%高い。

2検出方法の研究

2.1 Furfuraldehyde方法

ポリフェノールを決定するフォリンフェノール法の原理は、フェノール水酸基の減少量、フェノール水酸基の数、酸化剤によって生成される色付き化学物質の量が一定の範囲内で線形に関係していることである。この方法は、試薬の消費量が少なく、操作が便利で、感度が高く、安定性が良いという利点があるが、試薬の調製はより面倒である。

nanら[12]は、グアバの葉のポリフェノール含有量を決定するための基準としてガリア酸を用いた。フォリン試薬を10倍(na2co3 40%)希釈したところ、反応時間は7分、反応温度は50°cで、ポリフェノール含有量と吸光度は0 ~ 500 mgの範囲で良好な線形関係を示しました。duら[13]はこの方法を用いて決定したザクロの皮にポリフェノール含有量。試薬濃度0.6 mol/ l, 0.150 g/ ml na2co3を25°cの暗闇で50分間、検出波長765 nmで反応させた。1 ~ 6 mg/ lの範囲では、ガリア酸濃度と吸光値との間に良好な線形関係が認められた。zhuら[14]は、ザクロの皮に含まれるポリフェノールの含有量を判定するために、ガリア酸を基準とした。1.00 mL Fering試薬のエステル3.00 mL 10.0 g / 100 mL Na2C03、反応温度25°C反応時間120ミン计测672波長nmの範囲の10 ~ 100 mLμg /→『ガリア戦記』に酸濃度は線形absorbanceとの関係がよい。

2.2観察し

分光測光法は非常に特異的で、単純かつ高速であり、再現性は良好であるが、あまり正確ではない。漢方薬の最も有効な成分の定性および定量分析に適しています。wangら[15]は、紫外線分光測光法を用いてザクロの皮に含まれる総タンニン含有量を測定した。制御物質にはガリア酸を用い,検出波長は760 nmであった。線形absorbanceとの関係があった0.0502範囲を0.2526μg / mL (r = 0.9996)。yangら[16]は、紫外線分光測光法を用いてガリア酸の含有量を測定したザクロやザクロの皮の主成分.

その結果、の内容を示したザクロの皮に含まれるガリア酸は,ザクロの皮に含まれるガリア酸よりわずかに高かった。王〔17〕を決める観察し用いられる加水分解ポリフェノールコンテンツのざくろダムseedエキス、線形関係にが明るみになしpyrogallic酸濃度とabsorbance 0.014 0.07 mg / mLの範囲(r = 0.999 2)。加水分解ポリフェノール内容ざくろは7.55%シードのエキス。zhangら[18]は、ザクロの皮に含まれるタンニン含有量を測定するためにカゼイン法を用いた。その結果、タンニン内容が良好な線形関係を長くしたの範囲1.02-6.12 g / mL (r = 0.9993)、サンプルの回収率を97.4%た、RSDは1.21% (n = 6)。周季常等。[19]よりアニメざくろのポリフェノール収益の皮異なる抽出を使用することを起こす方法てっしつによってポリフェノールのコンテンツを測り測酒石酸方法に関する。その結果、硫酸エタノールアンモニウム水溶液二相系におけるザクロの皮ポリフェノールのマイクロ波照射抽出法の方が収率が高いことが示された。

2.3高性能キャピラリー電気泳動

この方法は、カラム効率が高く、分離速度が速く、選択性が高く、装置が簡単であるという特徴がある。しかし、注入量が少ないこと、調製能力が低いこと、感度が低いこと、および試料組成によって電気泳動が変化することから、分離再現性には影響があります。zhouらは[20]、被覆されていないキャピラリーカラム、バッファ溶液30 mmol/ lブタノール酸アンモニウム-30 mmol/ lリン酸二カリウム(20:9)、分離電圧20 kv、検出波長254 nm、カラム温度25°c、注入条件25 mbarおよび5.0 sを用いた。ザクロ皮抽出物中のエラグ酸の含有量を決定した。のエラグ酸の検出濃度0.039 8 ~ 0.318 4 mg/ mlの範囲であり、濃度はピーク領域と良好な線形関係を有していました(r = 0.999 3).この方法は、正確で信頼性が高く、ザクロ医薬品の品質管理に適しています。

2.4高性能液体クロマトグラフィー

高性能液体クロマトグラフィー(hplc)は高感度、高速、正確です。原理的には、沸点が高く、熱安定性が低く、相対分子量が400以上の有機化合物を分離して分析することができます。ただし、注射の前にサンプルを前処理する必要があります。liuら[21-22]は、逆相高性能液体クロマトグラフィー(rp-hplc)を用いて、ガリア酸の含有量を同時に測定した。エラグ酸、ザクロの皮と果汁に含まれるpunicalaginとellagic酸。注入量の『ガリア戦記』に酸、エラグ酸punicalinエラグ酸を範囲0.020-0.320μg 0.038-0.608μg 0.074 ~ 1.184μg 0.039% ~ 0.624μgのショー、それぞれ線形よい関係を築いてピーク地域(r 0.999 7、0.997 1 0.997 8 0.999と4番)。ザクロ果汁やザクロの皮に含まれる4つのポリフェノール成分の検出方法として利用できる。dingら[23]は、hplcを用いてザクロの皮エキス中のエラグ酸含有量を決定した。

最適な検出条件ではエラグ酸は良好な線形関係を持っていたピーク時の領域の範囲と5.36-171.40 mLμg /→活用が期待されるの内容を確定エラグ酸でざくろは皮エキス。leiらは[24]hplcを用いて、ザクロ葉抽出物の経口投与後のラットの血漿中のエラグ酸の含有量を測定した。その結果、ラットのエラグ酸は、経口血中濃度が低く、ほとんどが胃から吸収され、短時間でピークに達し、急速に吸収され、急速に分布し、除去されるという2つの区画モデルに基づいて分布していることが示された。ザクロの葉からのエラグ酸の吸収は、エラグ酸そのものよりも大きかった。

luoら[25]はrp-hplcを用いて同時に測定したプニカリンとエラグ酸の含有量ザクロの皮の膣発泡錠抽出物で。プニカルリンは0.098 - 0.610 mg/ ml (r = 0.999 1)の範囲で良好な線形関係を示し、エラグ酸は0.011~ 0.060 mg/ ml (r = 0.999 8)の範囲で良好な線形関係を示した。この方法は正確で単純であり、強い特異性を持つ。それはザクロの皮から抽出された膣発泡錠の品質管理のための方法を確立します。liら[26]は、rp-hplcを用いてザクロの皮に含まれるプニカラギンのタンニン成分を測定したところ、プニカラギンの含有量は高く(10%)、2005年版people&で規定されたタンニン質量分率10%以上という基準に合致した#中国薬局方39;sの。parida ablizら[27]は、hplcを用いて新疆ザクロの皮のガ酸含有量を測定し、9 ~ 90 mlの範囲で良好な直線性を示し、この方法が正確で信頼性があることを示した。

2.5液体クロマトグラフィー-質量分析

液体クロマトグラフィー質量分析法(lc-ms)は、液体クロマトグラフィー(lc)の強力な分離および分析機能と質量分析法(ms)の高感度同定および構造分析機能を組み合わせて、信頼性の高い正確な相対分子量および構造情報を提供します。xuら[28]はlc-msを同定に用いた天然ザクロ果汁中の主なポリフェノール。予備選挙の分析の結果、石榴の果汁エラグ酸を含み、punicalin、apigenin、apigenin-7-O -β-D-glucopyranoside、ルチンがあげ、3 3'で4-pentahydroxyflavanone 39で5、3 3'で4&#~ 39での5、7-pentahydroxyflavanone-6-D-glucopyranosideた。begoia cerdaらは[29]、ラットの主要ザクロポリフェノール成分であるpunicalaginの生物学的利用能と代謝物を検出するためのhplc-ms-ms分析技術を確立した。これは、プラズマ中のエラジタンニンの吸収の最初の報告であった。

2.6他

tangらは[30]の含有量を決定するために複素測定法を用いたザクロの皮にタンニンまた、ザクロの皮の種類によってポリフェノールの含有量が大きく異なることが分かった。wangらは[31]プルシアンブルー法を用いて、ザクロなど8種類の果実に含まれるポリフェノールの含有量を調べた。その結果、抽出物中のポリフェノールとタンニンの含有量は、その抗酸化特性と正の相関があることが示されました。zengらは[32]リンモリブデン酸カゼイン法を用いて、ザクロの皮に含まれるタンニンの総量を測定した。この方法は、強い特異性、簡単で簡単な操作、安定した結果、良好な再現性という特徴を有する。jiら[33]は、ザクロの皮抽出物中のエラグ酸とプニカリンの2成分を同時に検出するためにキャピラリー電気泳動を用いた。t検定では,hplcと比較して,2つのデータ群の差は統計的に有意ではなく,2つの方法の相関係数は>0.998で良好な精度を示した。

3概要

現在、いくつかの方法がありますザクロのポリフェノールを抽出する溶媒抽出、超音波支援抽出、マイクロ波支援抽出、超臨界流体抽出、および酵素法を含む。溶媒抽出法は、ザクロのポリフェノールを抽出する伝統的な方法であり、最も広く用いられている。このプロセスは比較的簡単で安定で信頼性が高いが、有機溶媒は大量に消費され、コストがかかり汚染される。超音波を利用した抽出法は、溶媒法に比べて時間と省エネ性が高く、抽出速度が速く、幅広い応用が可能です。超臨界流体抽出は、優れた輸送特性、強い透過性、高い抽出速度、穏やかな動作条件を有しています。特に熱に敏感な物質を分離するのに適していますが、一度に大量の設備投資、製品の歩留まりが低く、いくつかの成分の抽出にのみ適用できます;マイクロ波による抽出は、エネルギー、労力、時間を節約し、環境にやさしく、持続可能な技術である。酵素反応は、非常に特異的で、温和な条件、高い抽出速度、緑と省エネであり、大きな開発の可能性を持っています。もちろん、ザクロのポリフェノールを抽出・分離・精製する最適な方法を見出すためには、さらなる研究が必要である。

現時点では、決定するための主な方法ザクロのポリフェノール含有量フォリンフェノール法、分光測光法、高性能キャピラリー電気泳動、hplc、rp-hplc、およびlc-msが含まれます。フォリンフェノール法は非常に敏感だが、特異性は低い。分光測光法は非常に特異性が高く、高速で安定しており、再現性は良好だが、感度は低い。高性能毛細管電気泳動法は、高カラム効率、高速分離、少量噴射、低試薬消費を持っています;hplcは、高圧、高効率、高速、高感度の特徴を持ち、幅広い用途に使用されています。しかしながら、カラム効率の限界のため、1つまたは2つの成分を同時に定量化するのに一般的に使用され、複数の成分を同時に決定するのには適していない。lc-ms技術は、その強力な分析および同定機能により、今日では最も重要な分離および同定方法の1つとなっています。分析化学の分野ではさらに重要な役割を果たしていますが、装置は高価であり、高度な訓練を受けたオペレータが必要であるため、まだ広く普及していません。

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