高脂血症に対する黒米エキスの利益の研究

黒米はアントシアニンの含有量が多いため、黒米である。xiaら[1]およびlingら[2]は、動物実験研究を通じて、食餌黒米が実験動物の血中脂質レベルを低下させ、アテローム性動脈硬化の発生および発達を抑制することを発見し、この効果が種皮中のアントシアニンと関連していると推測している。さらに、いくつかのでvitro化学シミュレーション実験で、黒米エキスのフリーラジカル除去および抗酸化作用が確認されている[4][5][6][7]。しかし、黒米エキスの主な有効成分や体内での生理活性に関する研究はほとんどありません。

本研究黒米エキスの効能高脂血症ラットのための組成およびアントシアニンおよび脂肪酸の内容を分析します。黒米エキス中のアントシアニドと不飽和脂肪酸は、黒米の抗酸化作用と脂質低下作用の重要な材料基盤であると推測された。

Ⅰ。資料および方法

実験材料1。1

1.1.1試薬および器具

Total 抗酸化capacity (TAC), glutathione peroxidase (GSH-Px) activity, malondialdehyde (MDA) content とsuperoxide dismutase (SOD) 活動were provided by Nanjing JianjiのBioengineering Research Institute; 計cholesterol (TC) とtriglycerides (TG) were provided by Beijing Zhongsheng Bioengineering Hi-Technology Company; LDL-C とHDL-C were provided by Wenzhou East Biological Engineering Company. The total cholesterol (TC) とtriglyceride (TG) kits were provided by Beijing Zhongsheng Bioengineering Hi-Tech Company; のlow-密度lipoproteでcholesterol (LDL-C) とhigh-density リポ)cholesterol (HDL-C) kits were provided by Wenzhou East Biological Engineering Company. All other chemical reagents used でのanalysis were domestic analytical pure.

1.1.2黒米抽出物の準備

黒米の品種は"龍津1"吉林省農業科学院イネ研究所が栽培し、広東省農業科学院バイオテクノロジー研究所が提供した。"の新鮮な黒米;龍津1"(40メッシュ)を溶媒としてエタノール60%を50°cで抽出し、減圧濃縮することで、暗赤色の果皮エキスを得た。

準備玄米抽出蒸留水に溶かし、5%、10%、20%の溶液に調製し、低、中、高の3つのbrpe試験群のためのgavage材料として使用され、調製後2週間以内に使用された。

1.1.3実験動物とグループ

広州中医薬大学実験動物センターから提供された60匹の清潔なグレードの雄のsdラットは、体重160±20 gであった。1週間、正常な餌を与えて環境に順応させた後、眼窩静脈神経叢から血液を採取しました。レベルに合わせて、総コレステロール動物達はランダムに5つの組に分かれて:コントロールグループ、モデル団体と3つの実験団低、媒体BRPE晒される、12の各グループ、様々で食事を供給する実験のデザインによれば、そして実験期に入った。

1.2動物の餌やりと取り扱い

Animal feeding was completed でthe clean animal laboratory のGuangzhou University のTraditional Chinese Medicine. All groups のrats were housed in separate cages according にgroups, except for the control group which was fed とa basal diet, the other 4 groups were fed と高いfat diet (containing 85% basal diet, 10% egg yolk powder, 5% lard, 0.5% sodium cholate). During the experimental period, the control group とthe model group were given 1ml/100g body weight のsaline by gavage every day, とthe 5%, 10%, と20% BRPE groups were given 1ml/100g body weight の5%, 10% と20% BRPE, respectively, and were fed and watered ad libitum, and the amount のfood consumed was recorded every 3 days. The experimental period was 8 weeks. After the experiment, the animals were fasted for 8 h, the eyes were removed to collect blood and separate the serum, which was divided and stored at -20℃ for future use. The animals were killed by the cervical dislocation method, and the livers were separated and stored at -20℃.

1.3検出インデックスとメソッド

1.3.1血中脂質レベルの決定chod-pap酵素法によるtc, hdl-c, tg。ldl-cは、直接法7060自動生化学分析装置によって測定されます。

1.3.2血漿ldlの分離、精製および酸化。 

密度勾配遠心分離法により血漿ldlを分離し、lowry &法によりldlタンパク質含有量を測定した#39; s方法に関する。ldlタンパク質含有量はlowry &によって測定された#39;s法およびldlの酸化修飾はcu2 +酸化によって行われた[8]。ldlの純度と酸化度はアガロースゲル電気泳動により測定し、ldlの修飾度は相対電気泳動移動度(rem)により測定した。電気泳動の結果、ox-ldlのレムは1.4であった。

1.3.3ラット血清中の抗ox-ldl抗体価の測定 

According to the instructions のthe Protein DetectroTM ELISA Kit, the concentration のprepared ox-LDL and natural LDL was diluted to 10 µg protein with 1× coating solution. The prepared ox-LDL and natural LDL concentrations are diluted to 10 µg protein-ml-1 with 1× Coating Solution and incubated in the plate overnight at 4°C. The plate is washed 3 times with Wash Solution and then added to the plate with 100 µg protein-ml-1. The plate is washed 3 times with wash buffer, then secondary antibody solution diluted 1:500 with 100 µl の1×BSA Diluent/Blocking Solution is added and incubated for 1 h at room temperature.

十分な洗濯を終え、100µl基板解決をを加えた反応廃止100µl添加によって反応終了解決策を見出す約30分酵素計に読まれる状況と405 nmた。抗ox-ldl抗体の血清中の価数は、ox-ldlの吸光度からldlの吸光度を差し引いた値で表される[9]。

1.3.4肝臓組織均質化の準備とタンパク質含有量の決定 

肝臓紙を外側に口を漱いでなく冷生理食塩水で血を除去とフィルタ纸拭いて来て計れ、消毒した生理食塩水homogenizing媒体として使用を10%肝臓homogenate(女:v)℃4時頃に遠心分離機3,000gに℃4時15分、上澄み、一食分ずつに分けを店20℃で後悔する使用のために取っタンパク質の含有量とを决定するBradford' s方法に関する。

1.3.5血清および肝臓の総抗酸化能力(tac)、sod、gsh-px活性およびmda含有量の測定 

キットの指示に従って、tac、sod、gsh-px酵素活性、mdaを分光光度計で測定した。

1.3.6抽出物中のアントシアニン含有量の測定

The four anthocyanosides, namely, cornflowerin-3-glucoside, cornflowerin-3,5-diglucoside, geraniolin-3,5-diglucoside and mallowin, which were purified independently and identified to meet the chromatographic purity standard were used as standards[7], and then determined by HPLC method.

1.3.7脂肪酸含有量の決定抽出物中の脂肪酸含有量は、ガスクロマトグラフィー質量分析法(gc-ms)によって分析されます。

1.4データ処理と統計分析

統計解析にはspss 10.0ソフトウェアパッケージを使用しました。分散の均一性は、複数のグループの方法についてテストされた;分散が均一でない場合は、変数を交換した後に一方向性anovaを実行して均質性を達成した。グループ間の2×2比較にはlsd法が用いられた。

Ⅱ。結果と分析

2.1高脂血ラットにおける黒米皮抽出物の血中脂質への影響

表1リスト脂質レベルにおける各会派のネズミと言った事から模範グループに比べて見ると、血清TC、TG級3匹1組が著しく減少した(P < BRPE 0.05)も近い20% BRPEグループに由っていまたは比較グループより低いいました中で一定の用量反応関係、傘下の用量団体3団体のコンテンツ及びHDL-CのBRPE団体3を大きく上回った机种グループ(P < 0.05)。3つのbrpe群すべてのhdl-c値はモデル群より有意に高かった(p <0.05)。10%および20%のbrpeもldl-cレベルを低下させることができました(p <0.05)が、5%のbrpeは有意な影響を与えませんでした(p >0.05)。

表1ラットの血中脂質濃度に対する黒米エキスの影響(mmol・l-1、x±s、n=12)

cg =対照群、mg =モデル群

上付き文字が共通でない列の値は、p <0.05と大きく異なります。以下と同じ。

2.2高脂血症ラットのアテローム性動脈硬化指数に対する黒米エキスの影響

アテローム性動脈硬化症指数(ai)は、アテローム性動脈硬化症(as)のリスクを反映するために血液脂質のいくつかの指標を統合するパラメータであり、aiの増加はasの可能性の増加を示唆している。表2に示すように、3つの用量群のai1およびai2値は、モデル群よりも有意に低かった(p <3群間には用量効果の関係が認められた。

表2 Effect of Black Rice Extract on Atherosclerosis Index in Rats (x±s、n = 12)

AI1 = (TC-HDL-C) / HDL-C 、AI2 = LDL-C / HDL-C

2.3高脂質ラットに対する黒米エキスの抗酸化作用

2.3.1Totalな抗酸化力

モデル群のラットの血清および肝臓tacは、高脂血症を発症した対照群よりも低かった。TAC BRPE高まっネズミの取水口中で、低照射量傾向があるBRPEだ。これらの顔に肝臓TACを高め、しかし差がない製品(P> 0.05)、しかしこのグループ生物の血清TACのモデルに比べて著しく高まり制御グループ(P< 0.05)。10%と20%のbrpeは血清および肝tacを有意に増加させたが,20%のbrpeは対照群よりも血清tac値が高かった。10%および20%のbrpeは血清および肝tacを有意に増加させ、20%のbrpe群は対照群よりも血清tac値が高かった(p <0.05)。

Table 3 The Effect of Black Rice Extract on the Total Antioxidant Capacity of Serum and Liver in Rats (x±s、n = 12)

2.3.2抗酸化酵素活性および脂質過酸化物含有量

Long-term intake of high-fat diets increased the blood lipid level of rats, decreased the activities of GSH-Px and SOD, and significantly increased the content of lipid peroxidation products (MDA) (P＜0.05). The intake of BRPE enhanced the activity of antioxidant enzymes and showed a certain quantitative effect relationship (P＜0.05). Accordingly, the MDA content of rats in the three dose groups was significantly lower than that of the model group (P<0.05), showing a significant quantitative effect relationship (Table 4).

表4ラットの血清および肝臓における抗酸化酵素活性およびマロンジアルデヒド含有量に対する黒米抽出物の影響(x±s, n = 12)

2.3.3 Anti-ox-LDL 抗体レベル

ox-ldlは、抗体を産生するために体を刺激することができ、その抗体レベルはox-ldlの産生をある程度反映することができます。表5に示すように、ldl-cの増加に伴い、モデル群の抗ox-ldl抗体は対照群より有意に高く(p <0.05)、brpeの摂取により抗ox-ldl抗体の産生が有意に減少(p <0.05)し、用量依存関係が認められた。

表5 ラットの血清抗ox-ldl抗体値に対する黒米抽出物の効果 (x±s、n = 12)

テーブル6  黒米エキスのアントシアニン含有量

2.4 黒米エキスの成分分析

2.4.1アントシアニン

黒米抽出物からは、シアニジン-3-グルコシド、シアニジン-3,5-ジグルコシド、ゲラニウム-3,5-ジグルコシド、マラキチンの4種類のアントシアニンが検出された。その中で、シアニジン-3-グルコシドが最も多く、次いでシアニジン-3,5-ジグルコシド、マラチチンが最も少ない。表6に示すように、4つのアントシアニンの合計含有量は43.43 g/100gであった。

2.4.2脂肪酸含有量

The composition of fatty acids in に対して黒米 extract has high unsaturated characteristics. Among the 14 detected fatty acids, 6 are unsaturated fatty acids, accounting for 87.66% of the total fatty acids. The highest proportion of fatty acids are oleic acid and linoleic acid (Table 7).

表7 黒米エキスの脂肪酸含有量

Ⅲ。討論

3.1生物の脂質代謝および抗酸化ストレスレベルに対する黒米エキスの効果

高脂血症はasの独立した危険因子である。脂質、特にldl-cのレベルの増加はasの開発に直接関連しており、hdl-cはコレステロール逆輸送体の促進と抗酸化活性のために一定の抗as効果を持っています[10]。そのため、(tc-hdl)/ hdlの値は、asのリスクをある程度反映することができます[11]。

In the present study, the intake of 黒米extract was found to reduce serum TC, TG, and LDL-C levels and increase HDL-C levels in high-fat chow-fed rats, thus improving lipid metabolism and decreasing the risk of ASwith a significant quantitative dependence on the effect of intake. Studies have shown that hyperlipidemia is a major inducer of oxidative stress[12], and free radicals generated by oxidative stress further oxidize and modify LDL to form ox-LDL, which exerts a strong AS-causing effect by inducing endothelial dysfunction, promoting the phagocytosis of lipids by monocytes to form 泡cells, and facilitating the synthesis and secretion of a large number of cytokines and adhesion molecules by vascular cells[13].

本研究では、黒米エキスを摂取したラットではox-ldlの産生量が有意に減少し、血管への有害作用が減少した。ox-ldl産生量の減少は、黒米皮抽出物によるラットのldlの減少と、体内で過剰に産生された活性酸素ラジカルを除去し、ldlの酸化修飾を防ぐ抗酸化酵素の増強によるものと考えられる。

3.2黒米の皮エキスの抗脂質および抗酸化作用

本研究では、黒米エキスが脂質代謝を改善し、抗酸化酵素の活性を高め、脂質過酸化生成物の生成を減少させ、抗酸化作用と低脂血性の生物活性を有することを見出した。この結果は、xiaら[1]やlingら[2][3]が発見した黒米や黒米の皮の効果と一致している。

In the present study, the 黒米peel extract obtained by ethanol extraction was rich in 黒米pigments and 米bran oil, and it has been confirmed that anthocyanosides are the main components of 黒rice pigments [14][15]. The anthocyanosides and rice bran oil have received much attention because of をactive physiological functions. Therefore, the present study focused on the composition and content of anthocyanosides and fatty acids in black rice extract. The results showed that the extract contained 43.43% of anthocyanosides such as cornflower-3-glucoside and 14.5% of unsaturated fatty acids such as linoleic acid.

アントシアノシドの抗酸化活性に関する研究は広く報告されており、紫芋に含まれるアントシアノシドには、in vivoとin vitroの両方で抗酸化活性があることがkano[16]らによって示されている。sun ling[7]ら、zhang mingwei[6]らは、さまざまな黒米品種のin vitro抗酸化活性が、種皮のアントシアニン含有量と非常に有意な正の相関を示すことを発見した(p <これは、黒米や黒米エキスの抗酸化作用がアントシアニン化合物と密接に関連していることを示唆している。したがって、アントシアノシドは、黒米エキスの抗酸化作用の主な活性物質である可能性があります。

The unsaturated fatty acids oleic acid and linoleic acid rich in black rice skin extract belong to the n-6 series of unsaturated fatty acids. Medical nutrition studies have shown that n-3 and n-6 series of unsaturated fatty acids play an important role in reducing blood TC and improving lipid metabolism. Allman-F et al. found that sunflower seed oil rich in oleic acid in the diet can reduce blood TC and LDL levels.

アントシアニンの血中脂質代謝への影響に関する研究は、現在のところ比較的少ない。[18]シアニジン-3-グルコシドを豊富に含む紫トウモロコシ色素を高脂肪食に添加し、マウスを12週間飼育した。その結果、高脂肪食を単独で与えた場合と比較して、マウスの血清tg含有量が有意に減少した。アントシアニンの必須条件であるプロシアニジンをウサギに投与すると、ウサギの血液中のldl濃度が低下し、アテローム性動脈硬化性プラークの形成が減少することが山古[19]らによって明らかになった。この研究結果から、抗酸化作用と脂質低下作用を発揮する黒米エキスの主な活性物質は、アントシアニンと不飽和脂肪酸ではないかと推測されている。

Ⅳ。結論

黒米エキスの主成分を分析したところ、トウモロコシの花-3-グルコシドなどのアントシアニドが43.43%、脂肪酸が16.6%、そのうち87.66%が不飽和脂肪酸であった。様々な用量の黒米エキスを投与すると、高脂血症ラットの血中脂質レベルが低下し、体内の酸化ストレスが改善される。黒米に含まれるアントシアニドや不飽和脂肪酸が抽出されると推測された were the important material basis for the antioxidant and lipid-lowering 効果of black rice.

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