高脂血症に対する黒米エキスの利益の研究

黒米はアントシアニンの含有量が多いため、黒米である。xiaら[1]およびlingら[2]は、動物実験研究を通じて、食餌黒米が実験動物の血中脂質レベルを低下させ、アテローム性動脈硬化の発生および発達を抑制することを発見し、この効果が種皮中のアントシアニンと関連していると推測している。さらに、いくつかのでvitro化学シミュレーション実験で、黒米エキスのフリーラジカル除去および抗酸化作用が確認されている[4][5][6][7]。しかし、黒米エキスの主な有効成分や体内での生理活性に関する研究はほとんどありません。

本研究黒米エキスの効能高脂血症ラットのための組成およびアントシアニンおよび脂肪酸の内容を分析します。黒米エキス中のアントシアニドと不飽和脂肪酸は、黒米の抗酸化作用と脂質低下作用の重要な材料基盤であると推測された。

Ⅰ。資料および方法

実験材料1.1

1.1.1試薬および器具

総抗酸化能力(tac)、グルタチオンペルオキシダーゼ(gsh-px)活性、マロンジアルデヒド(mda)含有量とスーパーオキシドジムターゼ(sod)活性は、南京建建生命工学研究所によって提供された;総コレステロール(tc)とトリグリセリド(tg)は、北京中生生命工程ハイテク会社が提供した;ldl-cとhdl-cは温州東生物工程会社から提供された。総コレステロール(tc)とトリグリセリド(tg)キットは、北京中生生命工程ハイテク会社によって提供された;低密度リポタンパク質コレステロール(ldl-c)および高密度リポタンパク質コレステロール(hdl-c)キットは温州東生物工程会社によって提供された。分析に使用されたその他の化学試薬はすべて国内の分析用純粋剤であった。

1.1.2黒米抽出物の準備

黒米の品種は"龍津1"吉林省農業科学院イネ研究所が栽培し、広東省農業科学院バイオテクノロジー研究所が提供した。"の新鮮な黒米;龍津1"(40メッシュ)を溶媒としてエタノール60%を50°cで抽出し、減圧濃縮することで、暗赤色の果皮エキスを得た。

黒米エキスの調製物を蒸留水に溶かし、5%、10%、20%の溶液に調製し、低、中、高の3つのbrpe試験群のためのgavage材料として使用され、調製後2週間以内に使用された。

1.1.3実験動物とグループ

広州中医薬大学実験動物センターから提供された60匹の清潔なグレードの雄のsdラットは、体重160±20 gであった。1週間、正常な餌を与えて環境に順応させた後、眼窩静脈神経叢から血液を採取しました。レベルに合わせて、総コレステロール動物達はランダムに5つの組に分かれて:コントロールグループ、モデル団体と3つの実験団低、媒体BRPE晒される、12の各グループ、様々で食事を供給する実験のデザインによれば、そして実験期に入った。

1.2動物の餌やりと取り扱い

動物の餌やりは広州中医薬大学の清浄動物実験室で完成した。対照群は基礎的な餌を与え、残りの4群は高脂肪食(基礎的な餌85%、卵黄10%、ラード5%、コール酸ナトリウム0.5%)を与えました。取締チームは、実験時代とモデルグループを所与の1ml / g、生理食塩水体重に毎日に無理やり食べさせで100 g、5% 10% 20% BRPE団体を所与の1ml / 100 gに体重5%台BRPE投資額の10%、20%、それぞれ食事を用意し水広告libitumおり、量も消費四日ごとに记载されている。実験期間は8週間でした。実験の後、動物は8時間固定され、血液を採取して血清を分離し、将来の使用のために-20に分けて保管された。動物は子宮頸部脱臼法で殺害され、肝臓は分離されて-20℃に保管された。

1.3検出インデックスとメソッド

1.3.1血中脂質レベルの決定chod-pap酵素法によるtc, hdl-c, tg。ldl-cは、直接法7060自動生化学分析装置によって測定されます。

1.3.2血漿ldlの分離、精製および酸化。 

密度勾配遠心分離法により血漿ldlを分離し、lowry &法によりldlタンパク質含有量を測定した#39; s方法に関する。ldlタンパク質含有量はlowry &によって測定された#39;s法およびldlの酸化修飾はcu2 +酸化によって行われた[8]。ldlの純度と酸化度はアガロースゲル電気泳動により測定し、ldlの修飾度は相対電気泳動移動度(rem)により測定した。電気泳動の結果、ox-ldlのレムは1.4であった。

1.3.3ラット血清中の抗ox-ldl抗体価の測定 

の指示に従ってタンパク質DetectroTM ELISAキットがありましたox-LDL覚悟で濃度て自然LDLはを薄めた10µgタンパク質1×コーティング最善と思っている準備したox-LDLと自然を薄めたのLDL濃度は10µg protein-ml-1 1×コーティングゆえ孵化溶液で一夜を4°C降板された。その皿は、解決策を加えて洗うで3倍を洗っを皿100µg protein-ml-1。その皿は、で3倍を洗っバッファを洗い、そして二次抗体解決策1:500 100µで薄めl 1 BSA×キョンギド・シフンシ・ジョンワンドン)のm /に対する解決策が加わったり、ゆえ孵化れるなどを防ぐ1 h室温に戻します。

十分な洗濯を終え、100µl基板解決をを加えた反応廃止100µl添加によって反応終了解決策を見出す約30分酵素計に読まれる状況と405 nmた。抗ox-ldl抗体の血清中の価数は、ox-ldlの吸光度からldlの吸光度を差し引いた値で表される[9]。

1.3.4肝臓組織均質化の準備とタンパク質含有量の決定 

肝臓紙を外側に口を漱いでなく冷生理食塩水で血を除去とフィルタ纸拭いて来て計れ、消毒した生理食塩水homogenizing媒体として使用を10%肝臓homogenate(女:v)℃4時頃に遠心分離機3,000gに℃4時15分、上澄み、一食分ずつに分けを店20℃で後悔する使用のために取っタンパク質の含有量とを决定するBradford' s方法に関する。

1.3.5血清および肝臓の総抗酸化能力(tac)、sod、gsh-px活性およびmda含有量の測定 

キットの指示に従って、tac、sod、gsh-px酵素活性、mdaを分光光度計で測定した。

1.3.6抽出物中のアントシアニン含有量の測定

そこで、クロマトグラフィー純度基準を満たすために、コーンフラフェリン-3-グルコシド、コーンフラフェリン-3,5-ジグルコシド、ゲラニオリン-3,5-ジグルコシド、マローニンの4種類のアントシアニドをそれぞれ独立に精製・同定し、hplc法で測定した[7]。

1.3.7脂肪酸含有量の決定抽出物中の脂肪酸含有量は、ガスクロマトグラフィー質量分析法(gc-ms)によって分析されます。

1.4データ処理と統計分析

統計解析にはspss 10.0ソフトウェアパッケージを使用しました。分散の均一性は、複数のグループの方法についてテストされた;分散が均一でない場合は、変数を交換した後に一方向性anovaを実行して均質性を達成した。グループ間の2×2比較にはlsd法が用いられた。

Ⅱ。結果と分析

2.1高脂血ラットにおける黒米皮抽出物の血中脂質への影響

表1リスト脂質レベルにおける各会派のネズミと言った事から模範グループに比べて見ると、血清TC、TG級3匹1組が著しく減少した(P < BRPE 0.05)も近い20% BRPEグループに由っていまたは比較グループより低いいました中で一定の用量反応関係、傘下の用量団体3団体のコンテンツ及びHDL-CのBRPE団体3を大きく上回った机种グループ(P < 0.05)。3つのbrpe群すべてのhdl-c値はモデル群より有意に高かった(p <0.05)。10%および20%のbrpeもldl-cレベルを低下させることができました(p <0.05)が、5%のbrpeは有意な影響を与えませんでした(p >0.05)。

表1ラットの血中脂質濃度に対する黒米エキスの影響(mmol・l-1、x±s、n=12)

cg =対照群、mg =モデル群

上付き文字が共通でない列の値は、p <0.05と大きく異なります。以下と同じ。

2.2高脂血症ラットのアテローム性動脈硬化指数に対する黒米エキスの影響

アテローム性動脈硬化症指数(ai)は、アテローム性動脈硬化症(as)のリスクを反映するために血液脂質のいくつかの指標を統合するパラメータであり、aiの増加はasの可能性の増加を示唆している。表2に示すように、3つの用量群のai1およびai2値は、モデル群よりも有意に低かった(p <3群間には用量効果の関係が認められた。

表2ラットのアテローム性動脈硬化指数に対する黒米エキスの影響 (x±s、n = 12)

AI1 = (TC-HDL-C) / HDL-C 、AI2 = LDL-C / HDL-C

2.3高脂質ラットに対する黒米エキスの抗酸化作用

2.3.1Totalな抗酸化力

モデル群のラットの血清および肝臓tacは、高脂血症を発症した対照群よりも低かった。TAC BRPE高まっネズミの取水口中で、低照射量傾向があるBRPEだ。これらの顔に肝臓TACを高め、しかし差がない製品(P> 0.05)、しかしこのグループ生物の血清TACのモデルに比べて著しく高まり制御グループ(P< 0.05)。10%と20%のbrpeは血清および肝tacを有意に増加させたが,20%のbrpeは対照群よりも血清tac値が高かった。10%および20%のbrpeは血清および肝tacを有意に増加させ、20%のbrpe群は対照群よりも血清tac値が高かった(p <0.05)。

表3ラットにおける血清と肝臓の総抗酸化能に対する黒米エキスの効果 (x±s、n = 12)

2.3.2抗酸化酵素活性および脂質過酸化物含有量

高脂肪食を長期間摂取すると、ラットの血中脂質レベルが上昇し、gsh-pxとsodの活性が低下し、脂質過酸化物(mda)の含有量が有意に増加した(p <0.05)。brpeの摂取は、抗酸化酵素の活性を高め、一定の定量的効果関係を示した(p <0.05)。その結果、3群のラットのmda含有量はモデル群より有意に低く(p <0.05)、有意な効果関係を示した(表4)。

表4ラットの血清および肝臓における抗酸化酵素活性およびマロンジアルデヒド含有量に対する黒米抽出物の影響(x±s, n = 12)

2.3.3 Anti-ox-LDL 抗体レベル

ox-ldlは、抗体を産生するために体を刺激することができ、その抗体レベルはox-ldlの産生をある程度反映することができます。表5に示すように、ldl-cの増加に伴い、モデル群の抗ox-ldl抗体は対照群より有意に高く(p <0.05)、brpeの摂取により抗ox-ldl抗体の産生が有意に減少(p <0.05)し、用量依存関係が認められた。

表5 ラットの血清抗ox-ldl抗体値に対する黒米抽出物の効果 (x±s、n = 12)

テーブル6  黒米エキスのアントシアニン含有量

2.4 黒米エキスの成分分析

2.4.1アントシアニン

黒米抽出物からは、シアニジン-3-グルコシド、シアニジン-3,5-ジグルコシド、ゲラニウム-3,5-ジグルコシド、マラキチンの4種類のアントシアニンが検出された。その中で、シアニジン-3-グルコシドが最も多く、次いでシアニジン-3,5-ジグルコシド、マラチチンが最も少ない。表6に示すように、4つのアントシアニンの合計含有量は43.43 g/100gであった。

2.4.2脂肪酸含有量

黒米エキス中の脂肪酸の組成は、高い不飽和特性を有します。検出された14個の脂肪酸のうち、6個が不飽和脂肪酸で、全体脂肪酸の87.66%を占めた。脂肪酸の割合が最も高いのはオレイン酸とリノール酸である(表7)。

表7 黒米エキスの脂肪酸含有量

Ⅲ。討論

3.1生物の脂質代謝および抗酸化ストレスレベルに対する黒米エキスの効果

高脂血症はasの独立した危険因子である。脂質、特にldl-cのレベルの増加はasの開発に直接関連しており、hdl-cはコレステロール逆輸送体の促進と抗酸化活性のために一定の抗as効果を持っています[10]。そのため、(tc-hdl)/ hdlの値は、asのリスクをある程度反映することができます[11]。

本研究では、黒米抽出物の摂取は、高脂肪のチョウを与えたラットの血清tc、tg、ldl-c値を低下させ、hdl-c値を上昇させることで、脂質代謝を改善し、asのリスクを低下させることを明らかにした。研究によると、高脂血症酸化の重大な诱导体である[12]ストレスにさらにストレス酸化により生成されたフリーラジカル酸化LDLを修正しからox-LDLは、血栓をつくり強いによるAS-causing誘導効果を発揮内皮機能の異常、phagocytosis推進による脂質monocytes泡を形成細胞や合成を容易にする大量のcytokinesの分泌や接着分子血管細胞。[13]です。

本研究では、黒米エキスを摂取したラットではox-ldlの産生量が有意に減少し、血管への有害作用が減少した。ox-ldl産生量の減少は、黒米皮抽出物によるラットのldlの減少と、体内で過剰に産生された活性酸素ラジカルを除去し、ldlの酸化修飾を防ぐ抗酸化酵素の増強によるものと考えられる。

3.2黒米の皮エキスの抗脂質および抗酸化作用

本研究では、黒米エキスが脂質代謝を改善し、抗酸化酵素の活性を高め、脂質過酸化生成物の生成を減少させ、抗酸化作用と低脂血性の生物活性を有することを見出した。この結果は、xiaら[1]やlingら[2][3]が発見した黒米や黒米の皮の効果と一致している。

本研究では,エタノール抽出により得られた黒米皮抽出物には,黒米色素と米ぬか油が豊富に含まれており,アントシアニドが黒米色素の主成分であることが確認された[14][15]。アントシアノシドや米ぬか油は、その活性な生理機能から注目されています。そこで、本研究では、黒米エキス中のアントシアニドと脂肪酸の組成と含有量に着目した。その結果、抽出物にはトウモロコシの花-3-グルコシドなどのアントシアニドが43.43%、リノール酸などの不飽和脂肪酸が14.5%含まれていた。

アントシアノシドの抗酸化活性に関する研究は広く報告されており、紫芋に含まれるアントシアノシドには、でvivoとでvitroの両方で抗酸化活性があることがkano[16]らによって示されている。sun ling[7]ら、zhang mingwei[6]らは、さまざまな黒米品種のでvitro抗酸化活性が、種皮のアントシアニン含有量と非常に有意な正の相関を示すことを発見した(p <これは、黒米や黒米エキスの抗酸化作用がアントシアニン化合物と密接に関連していることを示唆している。したがって、アントシアノシドは、黒米エキスの抗酸化作用の主な活性物質である可能性があります。

黒米の皮に豊富に含まれる不飽和脂肪酸のオレイン酸とリノール酸は、n-6系の不飽和脂肪酸だ。医学的栄養学の研究では、n-3およびn-6シリーズの不飽和脂肪酸は、血液tcの減少と脂質代謝の改善に重要な役割を果たしていることが示されています。allman-fたちは、食事中のオレイン酸を豊富に含むヒマワリ種子油が血液tcとldlレベルを低下させることを発見した。

アントシアニンの血中脂質代謝への影響に関する研究は、現在のところ比較的少ない。[18]シアニジン-3-グルコシドを豊富に含む紫トウモロコシ色素を高脂肪食に添加し、マウスを12週間飼育した。その結果、高脂肪食を単独で与えた場合と比較して、マウスの血清tg含有量が有意に減少した。アントシアニンの必須条件であるプロシアニジンをウサギに投与すると、ウサギの血液中のldl濃度が低下し、アテローム性動脈硬化性プラークの形成が減少することが山古[19]らによって明らかになった。この研究結果から、抗酸化作用と脂質低下作用を発揮する黒米エキスの主な活性物質は、アントシアニンと不飽和脂肪酸ではないかと推測されている。

Ⅳ。結論

黒米エキスの主成分を分析したところ、トウモロコシの花-3-グルコシドなどのアントシアニドが43.43%、脂肪酸が16.6%、そのうち87.66%が不飽和脂肪酸であった。様々な用量の黒米エキスを投与すると、高脂血症ラットの血中脂質レベルが低下し、体内の酸化ストレスが改善される。黒米に含まれるアントシアニドや不飽和脂肪酸が抽出されると推測された 黒米の抗酸化作用と脂質低下作用の重要な材料基盤でした。

参照

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