黒米の信じられないほどの利点は、シアニジン3グルコシドを抽出します

Cyanidin-3-Glucosideは何ですか?

Cyanidin-3-glucoside (Cy-3-glc、C3G) アントシアニジン化合物の中で最も一般的で、広く分布し、豊富なアントシアニドです[1][2]。トウモロコシ-3-グルコシドは、特にオレンジ、赤、紫のような暗い色の植物の葉、果実、根に一般的に見られるに対して黒米[3]。Cornflower-3-glucosideアントシアニンの一つanthocyanoside組でと大量の研究、国内でも国外でCornflower-3-glucosideは多種多様な生物の活動が、心臓血管系疾患予防など視覚疲労の改善や糖尿病患者に対する削減patients'炎症などです

シアニジン-3-グルコシドの構造は何ですか?

アントシアノシドはフラボノイドに属するため、フラボノイドの典型的な構造であるc3-c6-c3を基本骨格とし、2-フェニルクロメンの誘導体である[4]。アントシアニンの親はアントシアニンであり、アントシアニンは不安定であるため、自然界では主にアントシアニンがリガンドとして他の糖と結合して異なる配糖体を形成する。ほとんどのアントシアニンは3,5,7位の炭素にヒドロキシ基を持つ。異なるアントシアノシドは、b環の置換基の違いにより形成される。現在、6 自然界で最も一般的なアントシアニドは、シアニジン、ペラルゴニジン、デルフィニジン、ピオニジン、ペウニジン、マルビジンである。アントシアニドの結合糖の種類、位置、量が異なるため、アントシアニドも異なる。主な結合糖は、グルコース、ラムノース、ガラクトース、キシロースなどの単糖と、ラムノグルコースやアカシアの二糖などの二糖です[5]。3-グルコシドの構造を図1-1に示します。図1は、トウモロコシの花とグルコースの組み合わせによって形成されます。

Fig。1-1    構成Cyanidin-3-glucoside

黒米エキス中のシアン-3-グルコシドの含有量

文献によると、の内容Cyanidin-3-Glucoside黒米は非常に豊富であり[6]、jing wangら【7】は、黒米のシアニジン-3-グルコシド含有量は(1.017±0.028)mg/gまでであると実験的に結論付けた。

この実験では、実験材料には黒米エキスを使用したそして、そのシアニジン-3-グルコシドを、ab-8多孔質樹脂、ポリアミド、デキストランゲルの3種類の充填剤を加えたクロマトグラフィーカラムで精製し、シアニジン-3-グルコシドを得た。

1実験する方法

1.1 技術方法

黒米抽出物からのシアニジン-3-グルコシドの調製

図2−1 シアニジン-3-グルコシドの製品検出条件

1.2黒米エキス中のシアニジン-3-グルコシドの定性的および定量的分析

1.2.1サンプル作成

後黒米アントシアニンを凍結乾燥洗い出し液、重さは10 mgの高野粉が6%ギ酸、でそれを溶解して今日に至る10 mLに一定量に使用のフィルタ針の0.2μmは濾過に使用され、超高机能を用いた判定が行われを説明する図で液体宇宙トリプル4段階レバー質量分析計連動しいる

表2-1勾配溶出法 ためUPLC

1.2.2定性的および定量的方法

(1)質的な方法

分離・精製された試料の定性分析は、多反応モニタリング(mrm)モードの走査の下、超高性能液体クロマトグラフィー(uplc)カラムを用いて、試料の保持時間を確認する紫外線(uv)および質量分析(ms)と組み合わせて行ったシアニジン-3-グルコシド(cyanidin-3-glucoside)シアニジン-3-グルコシドの略単離され精製された黒米エキスに含まれています。

(2) 量子化方法

10 mgに対して黒米エキス、A1、A2 A3面、A4、B1、B2 B3 B4 B5、やC1忠実の体重を凝縮されたなめ100 mlフォーミックス6%酸という物质と结合と測定Cyanidin-3-glucoside制御でとchromatographic同じ状況下でそして準備濃度解決を得た標準曲線方程式から、各サンプルの純度のキャラは式の計算(2から取得される。1)。

1.3 黒米抽出物からのシアニジン-3-グルコシドの分離精製

1.3.1黒米エキスの脱脂

1.3.2黒米抽出物からのアントシアニン抽出物の調製

1.3.3黒米抽出物からのシアニジン-3-グルコシドの単離と精製

(1)高分子樹脂ab-8への吸着による分離・精製

(2)ポリアミドカラムクロマトグラフィー

(3)ゲルカラムクロマトグラフィーによる分離精製

2. 結果と討論

2.1黒米エキス中のシアニジン-3-グルコシドの定性・定量的分析

2.2シアニジン-3-グルコシドの基準物質の質量分析パラメータの最適化

図2-2に示すように。

2.3黒米エキス中のシアニジン-3-グルコシドの定性的分析

確立された質量分析パラメータに基づいて、の保持時間シアニジン-3-グルコシド-黒米エキス中に含まれる超高性能液体クロマトグラフィーによって測定されました図2-3 (a)に示すように、シアニジン-3-グルコシドの標準溶液の保持時間は3.46分である。図2-3 (b)に示すように、黒米のアントシアニン抽出液の主なクロマトグラフィーピークの保持時間は3.46分であるため、黒米の主なアントシアニンはシアニジン-3-グルコシドである。

2.4黒米エキス中のシアニジン-3-グルコシドの定量

図2-4のように、濃度を横軸、ピーク面積を縦軸とした標準曲線を描きます。回帰式y =79.027 x +85.746 (yはピーク面積、xは濃度)、相関係数r2 =0.9991、シアニジン-3-グルコシドの線形関係は19.2 ~ 134.40 ng/mlの範囲で良好である。

Fig.2-3   黒米のクロマトグラムと Cyanidin-3-Glucoside ( C3G)基準

Table2-2   cy-3-glc標準溶液のピーク領域

Fig.2-4   標準曲線 C3Gの

2.5黒米抽出物からのシアニジン-3-グルコシドの単離と精製

2.5.1 ab-8マクロポーラス樹脂吸着法

Fig.2-5  黒米エキスのアントシアニンのクロマトグラム

Fig.2-6   マクロポーラス樹脂ab-8吸着により黒米から分離されたc3gのクロマトグラム

注:図a: a1のクロマトグラム。図b: a2のクロマトグラム;図c: a3のクロマトグラム;図d: a4のクロマトグラム

2.5.2ポリアミドカラムクロマトグラフィー

図2-7に示すように、無水エタノール、80%エタノールを用いて、a1、a4を含むポリアミドクロマトグラフィー用カラムを順に順方向グラジエント溶出します。uplc-ms / ms検出結果のクロマトグラムによると、この方法で黒米中のcy-3-g1cを分離精製し、ピーク時間はab-8結果と一致した。計算したところ、b1、b2、b3、b4の純度はそれぞれ91.6%、92.3%、93%、92%でした。a1やa4と比較して、シアニジン-3-グルコシドをポリアミドで精製した場合の純度が大幅に向上し、ポリアミド精製法が分離・精製に重要な役割を果たしていることが示されたシアニジン-3-グルコシド-黒米エキス中に含まれる.

注:a: b1クロマトグラム;B: B2色度図C: B3色度図D: B4色度図E: B5色度図

2.5.3ゲルカラムクロマトグラフィー

ポリアミド精製法により高純度シアニジン-3-グルコシドが得られた(図2-8)。検出結果のc1クロマトグラムおよびb5のクロマトグラムとの比較から、シアニジン-3-グルコシドの分離精製後のことがわかるこの方法を使った黒米エキス不純物のピークは見つかりませんでした。検出後、c1の純度は95%と計算されたが、純度を若干改善すると、シアニジン-3-グルコシドの分離・精製が促進されることがわかる。

計算後、の準備率純度95%のシアニジン-3-グルコシドは0.098%である研究室に近いです&#黒米中の0.1%のシアニジン-3-グルコシド含有量の39の以前の検出。同时に、の差が大きくさせた資料に比べ王晶ら[8]cyanidin-3-glucoside内容の(1.017±0.028)mg / gこの実験用いられるアプローチでがを表す準備率が高い取得した複合純度も改善されたことは推進がまん延しているに値する

図2-8グルコースゲルカラムで黒米から分離したc3gのクロマトグラム クロマトグラフ

3. 概要

本研究では、黒米エキス中のシアニジン-3-グルコシドの定性的および定量分析にuplc-ms / msを用いた。保持時間をシアニジン-3-グルコシドの基準物質と同じ質量分析、液相、uv条件で比較することで、単離され精製されたと結論できる黒米はアントシアニンモノマーを抽出するはcyanidin-3-glucoside。この結果は、文献で報告されている結果と一致している。

黒米の信じられないほどの利点は、シアニジン3グルコシドを抽出します

報告によると黒米エキスのシアニジン-3-グルコシドは多くの生理活性を持つ[10-13]、フリーラジカルの除去[9]、抗酸化[10]、抗炎症、抗腫瘍[8]、糖尿病の予防およびその腎症の改善[11][12][13]、肝臓の保護、視力の保護、虚血性脳卒中からの脳の保護[14][15][16]など。研究で報告されているように、シアニジン-3-グルコシドは、抗酸化ストレスによって虚血後の脳損傷を保護し、内皮性一酸化窒素合成酵素の合成を促進し、抗炎症作用を持ち、神経細胞のアポトーシスを阻害し、血漿ケモカインの発現を促進する。

haoら[6]は、シアニジン-3-グルコシドが、血清クレアチニンおよび尿素窒素濃度の上昇を有意に減少させ、kbro3によって引き起こされるキサンチンオキシダーゼ、マロンジアルデヒド、および腎臓の一酸化窒素の濃度が、マウスの重度の腎臓障害を引き起こすことを示した。腎臓に対する保護作用は、アントシアニンのフリーラジカル掃討能力である。zhang chuyangらは[17]、ヒト肝がん細胞株hepg-2をモデルとして、シアニジン-3- o-グルコシド(c3g)のh2o2に対する保護作用が細胞の酸化ストレスを誘発することを研究した。その結果はcyanidin-3-glucoside0 ~ 0.5ミリモル/ lの範囲で、hepg-2細胞に有意な毒性がなかった;高い(400μMol / L)、媒体(200μMol / L)、(50μ治療3時にcyanidin-3-glucoside濃度Mol / Lが大幅に増え総な抗酸化力超酸化物イオンdismutase活動グルタチオンの細胞の内容は減り、地盤が弱くなり、内malondialdehydeを减らすとともに内容だ。song nanらは、アルツハイマー病におけるグルコースおよび脂質代謝に対するシアニジン-3-グルコシドの効果を調べた's病(ad)モデルマウス。その結果、シアニジン-3-グルコシドはjnk / akt経路を介してインスリン抵抗性と炎症反応を調節し、adモデルマウスの脳のグルコース代謝障害を改善するが、脂質代謝を有意に抑制することはできず、脳海馬における加齢関連プラークの沈着を抑制できることが示された。

yu renqiangら[19]は、調査を目的としたcyanidin-3-glucoside効果肥満ラットの体重、血中脂質、インスリン抵抗性を調べました肥満ラットを高脂肪食で誘導し、対照群と実験群にランダムに分けた。実験群にはシアニジン-3-グルコシド100 mg/(kg・d)を投与し、対照群には同量の生理食塩水を投与した。連続5に無理やり食べさせ週間後その結果、体重内臓脂肪ミサ平均食べ物のエネルギー利用率、、総コレステロール、中性脂肪、低密度固醇コレステロール、動脈硬化指数、血糖値断食使用します血清治療にインスリン抵抗性より大幅に低く指数実験グループの制御グループの(r< 0.05)比重リポタンパクコレステロールながらadiponectinに比べて有意に多かった血清の(r< 0.05)、コントロールグループのしたがって、できるcyanidin-3-glucoside結論は導け遅らせる体重増加内臓脂肪ミサ肥満関連ブドウ糖と改善脂質代謝障害とインスリン抵抗性の原因というのは肥満ネズミその機構で推测の分泌を促して増えている血清adiponectin左右されるかもしれません。lin huaiら[18]は、ラット実験を用いて、鉛による肝臓および腎臓の損傷に対するcornflower 3-glucosideの効果を調べた。その結果、トウモロコシの花3-グルコシドは、肝臓および腎臓の損傷を誘導する鉛に対する顕著な保護作用を有することが示されたが、その作用機序は、さらなる研究が必要である。

黒米抽出シアニジン-3-グルコシド実験:

シアニジン-3-グルコシドは、国内外で研究され、糖尿病患者の心血管疾患の予防、視覚疲労の改善、炎症の軽減など多様な生物活性を示すが、血液や関連組織から検出されるシアニジン-3-グルコシドの含有量は極めて少ない。このパラドックスの原因は、シアニジン-3-グルコシドが消化管で代謝反応を起こし、関連する代謝物を生成して血液や関連組織に入り、関連する生物学的活性に影響を与えることである可能性がある。

この仮説を検証を使って研究をcyanidin-3-glucoside実験素材としてvivo、in vitro実験方法を使ってUPLC-MS・MS検出方法として、老廃物を質的にも量的にもに分析するcyanidin-3-glucoside優先し胃の代謝変化を模索するとクルムフラン・レイノルズの胃考えてる?また、ラットの血液中のシアニジン-3-グルコシドの代謝物を解析することにより、体内でのシアニジン-3-グルコシドの吸収が明らかになり、その代謝物がどのようなものであるかを解明するための基礎となりましたシアニジン-3-グルコシドは関連する生物学的活性を持つまた、シアニジン-3-グルコシドの活性機構を明らかにするための参考資料となる。主な研究内容と成果は以下の通りです。

(1) 実験材料として黒米を用い、ab-8高分子樹脂、ポリアミド、デキストランゲルカラム上のシアニジン-3-グルコシドを精製した。のcyanidin-3-glucosideの内容精製後の収率は95%、収率は0.098%であった。

(2) 実験材料としてシアニジン-3-グルコシドを用い,検出法としてuplc-ms / ms法を用いて,シアニジン-3-グルコシドの腸内代謝産物と主要代謝部位をin vitro培養液法で調べた。その結果、ラットの腸内には、2,4,6-トリヒドロキシ安息香酸、プロトカテク酸、p-ヒドロキシ安息香酸、バニル酸、ヒプリン酸、カフェイン酸フェノールアルデヒド、p-クマル酸、シアニジン-3-グルコシド、シアニジン、および11のシアニジン-3-グルコシドの代謝物が存在することが示されたferulic酸。主な代謝部位は空腸、回腸、結腸である。

(3) 実験材料にシアニジン-3-グルコシドを、検出方法にuplc-ms / ms法を用いて、シアニジン-3-グルコシドを投与したラットの胃、十二指腸、腸内膜、回腸、大腸をそれぞれ異なる時期に採取した。シアニジン-3-グルコシドの代謝物を検出し,2,4,6-トリヒドロキシ安息香酸,プロトカテク酸,p-ヒドロキシ安息香酸,バニル酸,ヒプリン酸カフェイン酸,フロログルシノールアルデヒド,p-クマル酸,シアニジン-3-グルコシド,シアニジンとフェルル酸ですシアニジン-3-グルコシドは主に胃液中に、シアニジン-3-グルコシドは主に十二指腸、全腸、回腸、結腸にアグリコン(シアニジン)として存在する。

(4) シアニジン-3-グルコシドを実験材料とし、uplc-ms / ms法を検出方法として、ラットの血液中のシアニジン-3-グルコシドの合計10の代謝物を検出した。p-coumaric酸cyanidin-3-glucosideしかし、シアニジンとフェルル酸では、2,4,6-トリヒドロキシ安息香酸は検出されず、シアニジン-3-グルコシドの他の腸内代謝物は、2,4,6-トリヒドロキシ安息香酸を除いて、腸を介して血中に吸収されることが示された。比較の結果、主な吸収部位は空腸、回腸、結腸であることがわかりました。

今回の研究では、シアニジン-3-グルコシドが消化管で代謝反応を起こし、関連する一連の代謝物が腸管を通って血流に吸収されることが確認された。

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